伴刀豆球蛋白A瓊脂糖凝膠

英文名稱：Con A Berpharose

貨號(hào)：B2781

規(guī)格：5ml

1.產(chǎn)品介紹

   伴刀豆球蛋白A-瓊脂糖凝膠是一種將伴刀豆球蛋白A（Con A)與鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的生物親和層析分離介質(zhì)。Con A是從巨豆中分離出來的一種植物血凝素，能與含有ɑ-D-吡喃甘露糖基、ɑ-D-吡喃葡萄糖基以及與其空間位置相關(guān)的分子基團(tuán)的結(jié)合。Con A與糖類分子結(jié)合主要在C-3、C-4及C-6的羥基部分，Con A與D-吡喃甘露糖的結(jié)合比與D-吡喃葡萄糖要強(qiáng)些，主要用于分離和純化一些糖蛋白、膜蛋白、糖脂、多糖、帶甘露糖苷或葡糖苷殘基的膜囊泡、lgM、激素脂蛋白等，例如人血清中胰蛋-白酶抑制劑、堿性磷酸酯酶、小牛脾磷酸二酯酶、不同變種的甲胎球蛋白和某些激素如絨毛膜促性-腺激素（HCG）、促黃體激素（LH）等物質(zhì)都可以用它純化。

2.規(guī)格

1ml（預(yù)裝柱）、5ml（預(yù)裝柱）、10ml（預(yù)裝柱）、20ml、100ml、500ml、1L 純化流程

應(yīng)用舉例：

平衡緩沖液：20mM Tris-HCl、0.5M NaCl、1mM CaCl2、1mM MnCl2、pH7.4

結(jié)合緩沖液：20mM Tris-HCl、0.5M NaCl、1mM CaCl2、1mM MnCl2、pH7.4

（該填料如需在 pH 小于5.0下操作，必須Mn2+和Ca2+的存在時(shí)才具有吸附活性）

洗脫緩沖液： 20mM Tris-HCl、0.5M NaCl、1mM CaCl2、1mM MnCl2、0.1M-0.2Mɑ-D-甲

基甘露糖苷（或ɑ-D-甲基葡萄糖苷）、pH7.4

（注：洗脫液中ɑ-D-甲基甘露糖苷或ɑ-D-甲基葡萄糖苷濃度可根據(jù)物質(zhì)吸附能力進(jìn)行線性或梯度洗脫。甘露糖和葡萄糖亦可以做洗脫物質(zhì)，但洗脫能力較弱。結(jié)合能力較強(qiáng)的物質(zhì)可采用降低洗脫液pH洗脫，但不要低于pH4.0?？刹捎门鹚猁}作為洗脫液，如0.1M硼酸鹽，pH6.5。）

平衡：用3-5個(gè)柱體積的平衡緩沖溶液進(jìn)行平衡，觀察檢測(cè)器的變化，直到電導(dǎo)率、  

                       pH值等參數(shù)不變。

上樣：樣品的預(yù)處理，樣品需至少用0.45μm濾膜過濾，在上樣，以免堵塞層析柱。

                      上樣量根據(jù)樣品的性質(zhì)和層析介質(zhì)的量進(jìn)行選擇，也可通過線性實(shí)驗(yàn)找到最佳

                       上樣量。

淋洗：用5-10個(gè)柱體積的平衡緩沖液進(jìn)行淋洗，觀察檢測(cè)器的變化，直到電導(dǎo)率、pH

                      值等參數(shù)基本不變。

（4）洗脫：使用 5-10 倍柱體積的洗脫液，收集洗脫峰（部分洗脫方式需中和液中和）。

（5）清洗保存：依次使用 3 倍柱體積的平衡緩沖液液和 5 倍柱體積的去離子水平衡填料，然后保存在等體積的20%乙醇中，置于 4-8 ℃保存。

5.在位清洗(CIP)：

填料可以重復(fù)使用無需再生，但隨著非特異性結(jié)合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和結(jié)合載量都下降，這時(shí)可按照下面方法對(duì)樹脂進(jìn)行清洗。

用 3-4 倍柱體積的含有0.5M NaCl的pH8.5或pH4.5的緩沖液清洗，然后立即用5倍柱體積的結(jié)合液平衡。

去除結(jié)合力較強(qiáng)物質(zhì)：用 2 倍柱體積的含1% Triton X-100，pH6.5的0.1M硼酸鹽緩沖液清洗，或20%乙醇或50%乙二醇溶液清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS，pH 7.4清洗。

6.注意事項(xiàng)：

（1）使用時(shí)保證柱子和緩沖液的溫度一致，避免柱床內(nèi)產(chǎn)生氣泡，影響純化效果。

（2）本產(chǎn)品保存條件為20%乙醇，4-8℃。

（3）運(yùn)輸：4-25℃，常，,避光。

（4）僅供科研實(shí)驗(yàn)使用。

伴刀豆球蛋白A瓊脂糖凝膠