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全功能免疫印跡(WB)實(shí)驗(yàn)代測(cè)

全功能免疫印跡(WB)實(shí)驗(yàn)代測(cè)
服務(wù)項(xiàng)目:細(xì)胞/組織 免疫印跡→外泌體蛋白 免疫印跡→血清/血漿/其他體液 免疫印跡→免疫共沉淀(Co-IP 蛋白與蛋白)→CHIP實(shí)驗(yàn)(DNA-蛋白相互作用)
信帆生物提供各類實(shí)驗(yàn)代測(cè)服務(wù),更多服務(wù)項(xiàng)目歡迎致電咨詢,我們將竭誠為您服務(wù)!

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  • 更新時(shí)間:2024-10-26
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詳細(xì)介紹

全功能免疫印跡(WB)實(shí)驗(yàn)代測(cè)

全功能免疫印跡(WB)簡(jiǎn)介:

免疫印跡(immunoblotting)又稱蛋白質(zhì)印跡(Western blotting),是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測(cè)復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測(cè)定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫測(cè)定的高特異性和敏感性,現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白,并能對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。結(jié)合化學(xué)發(fā)光檢測(cè),可以同時(shí)比較多個(gè)樣品同種蛋白的表達(dá)量差異。

 

全功能免疫印跡(WB) 原理:

通過SDS-PAGE凝膠將細(xì)胞或生物樣品內(nèi)的蛋白按照蛋白分子量從大到小規(guī)律分離開。經(jīng)過PAGE 分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜或PVDF膜).上,固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)(目前主要用HRP標(biāo)記的第二抗體) , 經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分(目前主要使用魯米諾和二抗中的HRP 反應(yīng)發(fā)出熒光,通過儀器或者膠片顯色)。該技術(shù)廣泛應(yīng)用于檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)。

 

全功能免疫印跡實(shí)驗(yàn)說明:

1、客戶需提供新鮮冰凍組織/細(xì)胞/血漿/外泌體/其他體液及一抗)

2、每張膜(1-8個(gè)樣品,一個(gè)抗體)

 

全功能免疫印跡(WB)實(shí)驗(yàn)操作流程:

1、細(xì)胞及組織蛋白質(zhì)抽提;

2、蛋白質(zhì)定量;

3、變性聚丙烯酰胺不連續(xù)凝膠電泳(SDS-PAGE);

4、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)膜;

5、膜的封閉;

6、一抗、二抗孵育;

7、結(jié)果檢測(cè):化學(xué)發(fā)光法檢測(cè),X 膠片曝光顯影;

8、數(shù)據(jù)分析;

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