大鼠血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)elisa試劑盒基本信息簡(jiǎn)介

血管緊張素轉(zhuǎn)換酶是一種膜結(jié)合糖蛋白分子，測(cè)定方法是放射性同位素法。

中文名 血管緊張素轉(zhuǎn)換酶 特    性 是一種膜結(jié)合糖蛋白分子 測(cè)定方法 放射性同位素法 關(guān)    系 慢性阻塞性肺部疾病及肺心病。ACE 是一種膜結(jié)合糖蛋白分子量為150000 含鋅屬二肽羧肽酶能使血管緊張素I(十肽由腎素轉(zhuǎn)化而來(lái)，肽鏈C 末端的組氨酸和亮氨酸殘基水解形成具有增壓作用的血管緊張素II(八肽) 。后者通過(guò)與血管氣管平滑肌作用引起血管支氣管收縮ACE 也具有降血壓作用并參與緩激肽P 物質(zhì)等多肽性炎性物質(zhì)的滅活A(yù)CE 。還能直接作用于腎上腺皮質(zhì)促進(jìn)醛固酮分泌因此ACE 是腎素血管緊張素醛固酮系統(tǒng)以及緩激肽系統(tǒng)的重要調(diào)節(jié)因素，影響人體多種生理機(jī)能ACE分布于全身各組織以肺副睪睪丸zui高。其次為十二指腸胰卵巢主動(dòng)脈甲狀腺脾腎與肝的含量甚微此外巨噬細(xì)胞單核細(xì)胞人胎膜胎盤(pán)羊水和臍靜脈血也含此酶各組織ACE主要定位于毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞由于肺組織具有豐富的血管床且肺毛細(xì)血管床內(nèi)皮細(xì)胞所含的ACE 位于細(xì)胞外(外周血管床內(nèi)皮細(xì)胞所含的ACE 位于細(xì)胞內(nèi)) 促使血管緊張素I 轉(zhuǎn)化為血管緊張素II 的作用強(qiáng)且肺循環(huán)是體內(nèi)*不使血管緊張素II 滅活的血管床肺循環(huán)流出的血液中血管緊張素II 的含量zui高一般認(rèn)為血管內(nèi)皮細(xì)胞的ACE 與胞膜密切結(jié)合幾乎不釋放ACE 而巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞產(chǎn)生的ACE 大部分釋放入血故當(dāng)ACE 升高時(shí)應(yīng)考

慮為巨噬細(xì)胞 單核細(xì)胞系統(tǒng)的分泌亢進(jìn)多數(shù)報(bào)道血清ACE 活性無(wú)性別年齡吸煙體位時(shí)間變化清醒睡眠狀態(tài)不影響ACE 的活性早產(chǎn)兒足月兒新生兒及健康成人的血清ACE 活性無(wú)明顯差別但李平生等 Ucer G.報(bào)道ACE 活性男大于女Ucer G.(1)等報(bào)道血清ACE 活性與吸煙年齡性別有關(guān),與氧分壓呈負(fù)性相關(guān)。

大鼠血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)elisa試劑盒基本信息檢測(cè)方法簡(jiǎn)介

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。如樣品濃度過(guò)高時(shí)，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋?zhuān)允箻悠贩显噭┖械臋z測(cè)范圍。

1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。

為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），37℃,60分鐘。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

4.每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（同生物素標(biāo)記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行檢測(cè)。

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