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產(chǎn)品分類熱烈祝賀老師在我司訂購試劑盒成功發(fā)表文章
文章名稱《BMSCs移植對缺血性腦卒中大鼠IL-1β、TNF-a表達的影響》,主要講述骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow mesenchymal stem ceIIs,BMSCs)移植治療大腦中動脈阻塞(Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO)模型鼠后,在不同時間點采用western blot、ELISA方法檢測IL-1β、TNF-α的表達變化,分析BMSCs移植對缺血性腦卒中后炎性因子的影響,探討B(tài)MSCs移植治療缺血性腦卒中修復(fù)受損神經(jīng)功能的可能抗炎機制。
文章中使用的大鼠IL-1β聯(lián)酶免疫試劑盒和大鼠TNF-a聯(lián)酶免疫試劑盒均有我司提供!
取幼年雄性SD大鼠骨髓腔細胞,通過全骨髓培養(yǎng)法和細胞貼壁培養(yǎng)法體外分離、培養(yǎng)、擴增得到BMSCs,傳至第4代,免疫熒光法鑒定,誘導(dǎo)分化為成骨細胞、脂肪細胞及神經(jīng)干細胞并鑒定。
取成年雄性SD大鼠,用Longa線栓法制造MCAO模型。參考Bederson JB評分法測評大鼠神經(jīng)功能缺損,篩選入組MCAO模型鼠;TTC染色法顯示腦組織梗死范圍,剔除TTC(-)或有出血的大鼠樣本。
取造模成功的MCAO模型鼠*隨機分為2組:A組/MCAO模型組(n=16),即建立MCAO模型后注射1ml生理鹽水;B組/實驗組(n=16),即建立MCAO模型后通過尾靜脈注射法移植1ml2×l09/L BMSCs;A、B組各分為處理后1d、3d、7d、14d時間點亞組(n=4)。
取正常大鼠設(shè)C組/空白組(n=4),不予任何干預(yù)。各亞組行心臟取血,ELISA方法檢測大鼠血清IL-1β、TNF-α的表達變化;生理鹽水灌注取腦,western blot方法檢測大鼠腦組織IL-1β、TNF-α的表達變化。
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結(jié)果
1.成功培養(yǎng)得到BMSCs。鏡下細胞形態(tài):原代BMSCs呈圓形或類圓形,貼壁數(shù)量少;經(jīng)過純化、擴增,貼壁細胞增多,呈長梭形,集落樣生長,局部呈漩渦狀;至P7代,細胞逐漸老化,以扁平細胞為主。細胞免疫熒光法鑒定:CD54(+)、CD34(-),符合BMSC免疫表型特點。BMSCs誘導(dǎo)為成骨細胞見細小顆粒于培養(yǎng)液;誘導(dǎo)為脂肪細胞見紅色脂滴于胞漿;誘導(dǎo)為神經(jīng)干細胞見棕色顆粒于胞漿。
2.大鼠神經(jīng)功能評分:造模后1天實驗組評分較模型組無明顯差異(P>0.05),3天、7天、14天實驗組較模型組均有下降(P<0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
3.大鼠血清IL-1β、TNF-α表達(單位:ng/L):1天、3天、7天、14天各亞組:IL-1β濃度為模型組27.0±0.35、29.2±0.60、25.2±0.65、22.8±0.66,實驗組25.2±0.31、26.8±0.56、20.8±0.39、19.2±0.94,空白組10.9±0.54;TNF-α濃度為模型組231±1.46、225±4.98、216±4.16、198±4.61,實驗組189±2.85、178±3.17、166±5.27、157±6.03,空白組146±6.86;
模型組較空白組均明顯增多(P<0.05),實驗組較模型組均減少(P<0.05),但較空白組仍增多(P<0.05)。模型組及實驗組與空白組比較:IL-1β表達1天增多,3天達高峰,7天下降,14天持續(xù)下降,但仍高于空白組(P<0.05);TNF-α表達1天增多達高峰,3天下降,7天、14天緩慢下降,但仍高于空白組(P<0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
4.大鼠腦組織IL-1β、TNF-α表達(灰度值):1天、3天、7天、14天各亞組:IL-1β為模型組5502±108.9、6267±160.5、4425±158.1、3352±187.1,實驗組4217±143.7、4706±111.8、3235±150.7、2307±120.7,空白組1874±70.7;TNF-α為模型組7801±148.9、6296±170.7、5399±240.9、3458±180.2;
實驗組6468±180.9、5789±119.7、4647±207.3、2828±152.6,空白組2215±159.5;模型組較空白組均增高(P<0.05),實驗組較模型組均降低(P<0.05)較空白組增高(P<0.05)。模型組及實驗組與空白組比較:IL-1β表達1天增高,3天達高峰,7天下降,14天持續(xù)下降但仍高于空白組(P<0.05);
TNF-α表達1天增高達高峰,3天下降,7天、14天緩慢下降,但仍高于空白組(P<0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
結(jié)論
1.缺血性腦卒中模型鼠中IL-1β、TNF-α表達增加,其神經(jīng)損傷可能與炎癥反應(yīng)有關(guān)。
2.骨髓間充質(zhì)干細胞移植可降低MCAO模型鼠IL-1β、TNF-α的表達,其修復(fù)神經(jīng)功能的作用可能與BMSC下調(diào)炎性因子減輕炎癥反應(yīng)
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ELISA試劑盒:進口ELISA試劑盒,國產(chǎn)ELISA試劑盒,人elisa試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒等。
培養(yǎng)基:微生物培養(yǎng)基,顯色培養(yǎng)基,BD培養(yǎng)基,gibco培養(yǎng)基等。
血清:胎牛血清,科研血清,動物血清,NQBB,Hyclone,Gbico原裝血清 。
生物試劑:Amresco,Sigma,ABM,BIO-RAD,BD,ABCAM等進口試劑。
標準品對照品:進口對照品,進口對照藥材,進口標準品.
抗體:一抗,二抗,流式抗體等。
放免試劑盒:進口放免試劑盒,國產(chǎn)放免試劑盒,進口美國鳳凰等放免試劑盒。
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