RIPA 裂解緩沖液 (RIPA Lysis Buffer)

描述： RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer)對動物細(xì)胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強(qiáng)裂解作用，是經(jīng) 典和zui常用的細(xì)胞組織快速裂解液。使用 RIPA Buffer 制備用于 Western 特別是用于免疫共沉淀的 裂解產(chǎn)物已經(jīng)是一種首選的標(biāo)準(zhǔn)操作，也適用于大部分抗原表位的檢測，特別是免疫共沉淀等實驗。

組成： 100 ml RIPA Buffer：50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.1% SDS.

儲存：4  ℃保存 制備細(xì)胞裂解產(chǎn)物

1. 800g 4℃離心 5 分鐘收集培養(yǎng)細(xì)胞，估計細(xì)胞離心后的體積（PCV, 106 cells=~20 ml, 107 cells

=~100 ml PCV）；

2. 每 50～100 ml PCV 加入 5 倍體積 RIPA 裂解緩沖液（250~500 ml）,冰浴放置 10 分鐘，并每隔

5 分鐘在漩渦混合儀上振蕩 30 秒；

3. 12000g 4℃離心 10 分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得細(xì)胞總蛋白產(chǎn)物；

 注意：假如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠，可先 95℃加熱 5 分鐘，迅速冰浴 5 分鐘，然后再進(jìn)行步驟 3

制備組織裂解產(chǎn)物

1. 取 50-100 mg 組織在冰上剪成碎片，用預(yù)冷的 PBS 洗滌 2 次離心棄去 PBS；

2. 加入 0.5-1 ml 預(yù)冷 RIPA 裂解緩沖液；

3. 4℃用玻璃勻漿器勻漿 20-40 次，直到 95％的細(xì)胞被破碎，然后在冰浴中放置 10 分鐘，并每隔

5 分鐘在漩渦混合儀上振蕩 30 秒；

4. 12000g 4℃離心 10 分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得組織總蛋白產(chǎn)物；

 注意：假如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠，可先 95℃加熱 5 分鐘，迅速冰浴 5 分鐘，然后再進(jìn)行步驟 4

說明：

1. 在轉(zhuǎn)移上清液時不要吸入底部的沉淀物；

2. 在做免疫沉淀或免疫共沉淀時在實驗前進(jìn)行蛋白的提取，以避免某些不穩(wěn)定蛋白的降解；

3. 在該 RIPA 裂解緩沖液中未加入蛋白酶抑制劑，用戶可自行選擇添加。