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上海信帆生物:關(guān)于脫脂奶粉和BSA作為封閉劑的一些問題

更新時(shí)間:2016-04-28      瀏覽次數(shù):4657

Q:western blot 中脫脂奶粉封閉的是哪些蛋白?原理是什么?

A:脫脂奶粉中主要是乳清蛋白和酪蛋白。原理就是用非抗原的蛋白去封閉膜,避免標(biāo)記抗體固定在膜上引起背景增高。

Q:請問封閉液和抗體稀釋液用BSA和脫脂奶粉有什么區(qū)別呢?

有人跟我說奶粉的封閉效果更好些,但是通常只能用于WesterBlot,如果要做elisa或者phage display時(shí)候,蛋白鋪板的話,不能使用脫脂奶粉??墒且灿腥苏f可以,請問是否有這個說法呢?

A:所謂封閉是用以減少或消除載體上的非特異性結(jié)合蛋白的分子,一般是脫脂奶粉或BSA.對WesterBlot來說兩者均為常用封閉劑。脫脂奶粉的成份遠(yuǎn)較BSA復(fù)雜,如果要做ELISA或者phage display時(shí)候,我們還是用BSA,有關(guān)的操作手冊上也是如此。 我推測也沒有依據(jù)說脫脂奶粉就不能用,注意的是各種品牌的脫脂奶粉中殘留的脂質(zhì)量不同, 脂質(zhì)是會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的,即使是用于WesterBlot也要有所挑選, 有興趣可以試試,但是不要在正式實(shí)驗(yàn)時(shí)試。

Q:請問大家,封閉的時(shí)候,為什么一定要用脫脂奶粉?

A:膜上有蛋白缺損點(diǎn),不用蛋白封蛋白缺損點(diǎn)容易出現(xiàn)非特異染色。

也可用BSA封,效果并不比脫脂奶粉好。

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