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細(xì)胞成活率形態(tài)學(xué)觀察法及檢測(cè)法

更新時(shí)間:2015-09-09      瀏覽次數(shù):1385
  • 細(xì)胞成活率形態(tài)學(xué)觀察法及檢測(cè)法:

    細(xì)胞成活率,判斷之形態(tài)學(xué)觀察法:

    細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)顆?;蚩张?。

    細(xì)胞內(nèi)如果出現(xiàn)顆粒物質(zhì),表明細(xì)胞處于非健康狀態(tài)。

    同樣,細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)空泡也說明細(xì)胞處于非健康狀態(tài)。

     細(xì)胞喪失雙折射性:

    如果發(fā)生在單層細(xì)胞:一個(gè)具有雙折射性的正常細(xì)胞逐步失去這一特征(相差顯微鏡下細(xì)胞邊緣成暈環(huán)),則提示該細(xì)胞已經(jīng)死亡,即zui終干枯死亡。

    如果發(fā)生在懸浮細(xì)胞:正常懸浮細(xì)胞清晰透明,如胞內(nèi)出現(xiàn)顆?;蜃儨啙岜砻骷?xì)胞受損,甚至死亡。

    怎樣去除死細(xì)胞?單層培養(yǎng)的細(xì)胞死亡后,一般會(huì)漂浮起來,因此不需要特殊處理。

    而懸浮細(xì)胞或原代培養(yǎng)細(xì)胞則要通過密度離心(如Ficoll梯度)方法收集死細(xì)胞。

    細(xì)胞成活率檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

    即刻檢測(cè)實(shí)驗(yàn)——

    染料柜染實(shí)驗(yàn):原理——萘黑、臺(tái)盼藍(lán)以及很多其他染料均不能透過活細(xì)胞。概要——將細(xì)胞懸液與染料混勻,在低倍顯微鏡下檢查。材料包括無菌材料,即細(xì)胞;生長(zhǎng)液;0.25%胰酶;PBSA.非滅菌材料即:血細(xì)胞計(jì)數(shù)板;生存力染料;巴斯德吸管;顯微鏡;手執(zhí)計(jì)數(shù)器。操作步驟:

    1、用胰蛋白酶消化或離心,重懸制備高深度的細(xì)胞懸液

    2、取一塊干凈的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,將蓋玻片固定在適當(dāng)位置上。

    3、將一<滴細(xì)胞懸液和一滴(臺(tái)盼藍(lán))或四滴(萘黑)染料混勻/li>

    4、加至血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室中。

    5、靜置1~2min(但不要放置很久,否則活細(xì)胞會(huì)受到損傷而吸收染料)。

    6、將計(jì)數(shù)板置于顯微鏡下,用10倍物境找到計(jì)數(shù)網(wǎng)格。

    7、計(jì)數(shù)細(xì)胞總及著色細(xì)胞的數(shù)目。

    8、清洗血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,放入盒內(nèi)。

    實(shí)驗(yàn)分析-計(jì)算未著色細(xì)胞的百分?jǐn)?shù),該數(shù)字即為本方法所得出的細(xì)胞生存力百分?jǐn)?shù)。

    據(jù)統(tǒng)計(jì),原代培養(yǎng)細(xì)胞成活率一般為50%~90%。細(xì)胞系一般為90%~100%存活。凍融細(xì)胞一般為50%~80%存

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