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丙酮酸脫氫酶(PDH)試劑盒的測定步驟,注意事項以及計算方法

更新時間:2015-08-10      瀏覽次數(shù):1719

上海信帆生物代理銷售“丙酮酸脫氫酶(PDH)試劑盒",現(xiàn)貨供應(yīng),提供技術(shù)指導(dǎo)和售后服務(wù),歡迎。

測定步驟

  1. 調(diào)零

用蒸餾水于605nm處調(diào)零。

  1. 樣本測定

1)取900μL工作液加入1mL玻璃比色皿,在37℃哺乳動物)25℃(其它物種)中孵育5min

2)取出比色皿,加入50μL酶液,混勻;立即記錄605nm處初始吸光值A1,37℃哺乳動物)25℃(其它物種)中準(zhǔn)確反應(yīng)1min,記錄605nm1min后的吸光值A2,計算ΔA=A1-A2。

丙酮酸脫氫酶(PDH)試劑盒注意事項

1、測定過程中所有試劑和樣本在冰上放置,以免變性和失活。

2、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持3725,取小燒杯一只裝入一定量的3725蒸餾水,將此燒杯放入3725水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。

3、兩個人同時做此實驗,一個人比色,一個人計時,以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。

PDH活性計算

1組織中PDH活性計算:

1 按樣本蛋白濃度計算

單位的定義:每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。

 PDH活性(U/mg prot=反應(yīng)總體積(950μL÷樣本體積(50μL÷反應(yīng)時間(1min)÷2,6-二氯吲哚酚消光系數(shù)(21×10-3×ΔA ÷蛋白濃度(mg/mL)=905×ΔA÷蛋白濃度(mg/mL)

2 按樣本鮮重計算

單位的定義:每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。

 PDHU/g 鮮重=反應(yīng)總體積(950μL÷樣本體積(50μL÷反應(yīng)時間(1min)÷2,6-二氯吲哚酚消光系數(shù)(21×10-3×ΔA ÷樣本鮮重(g/mL)=905×ΔA ÷樣本鮮重(g/mL)

2、細菌或培養(yǎng)細胞中PDH活性計算:

1)按樣本蛋白濃度計算

單位的定義:每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。

 PDH活性(U/mg prot=反應(yīng)總體積(950μL÷樣本體積(50μL÷反應(yīng)時間(1min)÷2,6-二氯吲哚酚消光系數(shù)(21×10-3×ΔA ÷蛋白濃度(mg/mL)=905×ΔA÷蛋白濃度(mg/mL)

2 按細菌或細胞密度計算

單位的定義:每1萬個細菌或細胞在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。

PDH活性(U/104 cell=反應(yīng)總體積(950μL÷樣本體積(50μL÷反應(yīng)時間(1min)÷2,6-二氯吲哚酚消光系數(shù)(21×10-3×ΔA ÷細菌或細胞密度(104 cell /mL)=905×ΔA÷細菌或細胞密度(104 cell /mL)

丙酮酸脫氫酶(PDH)試劑盒

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