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微生物鑒定中常用的生化反應

更新時間:2024-04-24      瀏覽次數(shù):380

微生物鑒定中常用的生化反應

實驗原理:

1. 有些細菌具有合成淀粉酶的能力,可以分泌胞外淀粉酶。淀粉酶可以使淀粉水解為麥芽糖和葡萄糖,淀粉水解后遇碘不再變藍色。

2. 細菌產(chǎn)生的脂肪酶能分解培養(yǎng)基中的脂肪生成甘油及脂肪酸。脂肪酸可以使培養(yǎng)基pH下降,可通過在油脂培養(yǎng)基中加入中性紅做指示劑進行測試。中性紅指示范圍為pH6.8(紅)——8.0(黃)。當細菌分解脂肪產(chǎn)生脂肪酸時,則菌落周圍培養(yǎng)基中出現(xiàn)紅色斑點。

3. 某些細菌分泌蛋白酶分解明膠,產(chǎn)生小分子物質(zhì)。如果細菌具有分解明膠的能力,則培養(yǎng)基可由原來固體狀態(tài)變成液體狀態(tài)。

4. 牛乳中主要含有乳糖、酪蛋白等成分。細菌對牛乳的利用主要是指對乳糖及酪蛋白的分解和利用。牛乳中常加入石蕊作為酸堿指示劑和氧化還原指示劑。石蕊中性時呈淡紫色,酸性時呈紅色,堿性時呈藍色,還原時則部分或全部脫色。細菌對牛乳的利用可分三種情況:(1)酸凝固作用:細菌發(fā)酵乳糖后,產(chǎn)生許多酸,使石蕊牛乳變紅,當酸度很高時,可使牛乳凝固,此稱為酸凝固。(2)凝乳酶凝固作用:某些細菌能分泌凝乳酶,使牛乳中的酪蛋白凝固,這種凝固在中性環(huán)境中發(fā)生。通常這種細菌還具有水解蛋白質(zhì)的能力,因而產(chǎn)生氨等堿性物質(zhì),使石蕊變藍。(3)胨化作用:酪蛋白被水解,使牛乳變成清亮透明的液體。胨化作用可以在酸性條件下或堿性條件下進行,一般石蕊色素被還原褪色。

小妙招:

1.如何解釋淀粉酶為胞外酶而非胞內(nèi)酶:淀粉為大分子物質(zhì),進入細胞很困難,甚至需要高耗能的胞吞作用,因而通過胞外酶的作用,將淀粉水解為較小分子葡萄糖后再運入細胞內(nèi),不需要高耗能的胞吞作用。

2. 碘液的作用:由于淀粉經(jīng)過水解會生成葡萄糖,葡萄糖為多羥基醛,因此可以利用醛這個基團的特征性質(zhì)進行驗證,比如銀鏡反應,斐林試劑等,呈陽性說明淀粉水解產(chǎn)生葡萄糖。陰性則說明淀粉沒有被水解。

注意事項:

1. 在淀粉水解實驗中,觀察各種細菌的生長情況,加入碘液時要輕輕旋轉,使得碘液均勻鋪滿整個平板。

2. 每個實驗需要設置陰性和陽性對照組,以保證實驗結果。

3. 細胞生長較快,需要及時觀察和記錄。

4. 接種前要用記號筆做好標記,接種時要


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