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明膠酶譜試劑盒組織細(xì)胞樣本裂解液

更新時(shí)間:2023-07-04      瀏覽次數(shù):813

明膠酶譜試劑盒組織細(xì)胞樣本裂解液

該細(xì)胞裂解液可用于明膠酶譜試劑盒中的組織和細(xì)胞樣本的裂解。

述:

非變性細(xì)胞裂解液(Nondenaturing Lysis Buffer)內(nèi)含非離子型去垢劑和鹽,能裂解細(xì)胞并在非變性條件下釋放胞漿蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。非變性條件下的裂解蛋白產(chǎn)物最大限度地保留了蛋白的特性和功能,如抗原-抗體結(jié)合能力或酶學(xué)活性,因此適宜于進(jìn)行免疫共沉淀。另外,有些抗體對(duì)非變性蛋白具有更高的結(jié)合能力或只能識(shí)別非變性蛋白的抗原位點(diǎn),這種情況下,應(yīng)該使用非變性細(xì)胞裂解液制備總蛋白


產(chǎn)品規(guī)格產(chǎn)品價(jià)格
100ml350
500ml
950

儲(chǔ)存:
4℃保存 12個(gè)月有效
規(guī)格:
100ml  500ml
操作步驟:

制備細(xì)胞裂解產(chǎn)物
1. 800g 4℃離心5分鐘收集培養(yǎng)細(xì)胞,而后用預(yù)冷的PBS洗滌細(xì)胞兩次。估計(jì)細(xì)胞離心后的體積(PCV,106cells=~20ul, 107cells =~100ul PCV);
2. 50100ul PCV加入5倍體積非變性組織細(xì)胞裂解液250~500ul,渦旋震蕩10秒,冰浴放置20分鐘;
3. 12000g 4℃離心15分鐘,將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中,即得細(xì)胞總蛋白產(chǎn)物,
制備組織裂解產(chǎn)物
1. 50-100mg組織在冰上剪成碎片,用預(yù)冷的PBS洗滌2次離心棄去PBS;
2. 加入0.5-1ml預(yù)冷的非變性組織細(xì)胞裂解液;
3. 4℃用玻璃勻漿器勻漿20-40次,直到95%的細(xì)胞被破碎,渦旋震蕩10秒,冰浴放置20分鐘;
4. 12000g4℃離心15分鐘,將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中,即得組織總蛋白產(chǎn)物,可用于后續(xù)的免疫沉淀或者Western Blot,明膠酶譜檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)。
注意:
1. 在轉(zhuǎn)移上清液時(shí)不要吸入底部的沉淀物;
2. 在做免疫沉淀或免疫共沉淀時(shí)最好在實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行蛋白的提取,以避免某些不穩(wěn)定蛋白的降解;
3. 在該裂解緩沖液中未加入蛋白酶抑制劑,用戶可自行選擇進(jìn)行添加。

明膠酶譜試劑盒組織細(xì)胞樣本裂解液


 


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