液體樣本甘油檢測(cè)試劑盒這么操作更準(zhǔn)確

上海信帆生物供應(yīng)甘油檢測(cè)試劑盒，可以檢測(cè)的樣本包括血液、細(xì)胞培養(yǎng)基、體液、酒類飲料中的甘油濃度。

原理：在 ATP 存在下甘油被甘油激酶磷酸化為 3-磷酸甘油，再被甘油磷酸氧化酶氧化產(chǎn)生過(guò)氧 化氫；在過(guò)氧化物酶作用下生色底物轉(zhuǎn)化為苯醌亞胺，其光密度值與甘油濃度成正比。

適用范圍：測(cè)定血液、細(xì)胞培養(yǎng)基、體液、酒類飲料中的甘油濃度。

組成 ：

R1 試劑 40 ml R2 試劑 10 ml

4 mmol/L 甘油標(biāo)準(zhǔn)品 1 ml

4 oC，儲(chǔ)存 6個(gè)月。

所需設(shè)備：酶標(biāo)儀、生化分析儀或 721、722 型可見(jiàn)光分光光度計(jì)。最佳工作波長(zhǎng) 550nm，如 無(wú)此波長(zhǎng)建議優(yōu)先選用 570nm、次選 530、490nm。

操作步驟：

一. 樣本處理： 酒類、飲品、清澈液體樣本：可直接進(jìn)行測(cè)定，如超過(guò)線性范圍可用蒸餾水或生理鹽水稀釋后 再測(cè)定。

培養(yǎng)液：取不含酚紅、無(wú)顏色、無(wú)血清的細(xì)胞培養(yǎng)基，如有細(xì)胞碎片應(yīng) 4oC,，12,000g 離心 5min,

取上清進(jìn)行測(cè)定。

血液：新鮮抗凝血，4oC，2,000g 離心 5min 得到血漿；非抗凝血，先 4oC 靜置 2h 得到血清后， 2000g 離心 10min,除去血細(xì)胞。將得到的血漿/血清 70oC 加熱 10 分鐘滅活內(nèi)源脂肪酶，12,000g 離心 10min ,取上清測(cè)定或-20oC 保存。

二 .工作溶液配制：按 4:1 比例，取 4 ml 試劑 R1 與 1 ml 試劑 R2 混合，立即使用或 4oC 保存

<1 天，變色棄去。

三 .標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：用蒸餾水、生理鹽水或與樣品緩沖液一致的液體，將 4 mM 甘油標(biāo)準(zhǔn)品倍比稀 釋為 1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µmol/L，通常取其中 4~6 管即可， 注意設(shè)置 0 濃度對(duì)照反應(yīng)管。

四. 甘油濃度測(cè)定：

1.參見(jiàn)下表進(jìn)行加樣。為使反應(yīng)時(shí)間盡量一致，減小實(shí)驗(yàn)誤差，可先加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣品，然后再加入工作溶液。（注意：當(dāng)甘油濃度較低時(shí)，可將待測(cè)樣品與工作溶液按照   100µl:100µl體積混合，然后再進(jìn)行測(cè)定，但是如果樣品體積超過(guò)  100µl    時(shí)將會(huì)稀釋工作液中酶的濃度，使 反應(yīng)靈敏度下降。如果待測(cè)樣品濃度超過(guò)線性范圍，可進(jìn)行適當(dāng)稀釋，然后根據(jù)稀釋倍數(shù)來(lái)計(jì)算樣品中甘油濃度。）

2.37oC 或 25oC 反應(yīng) 15 分鐘。反應(yīng)平衡后顏色在 60 分鐘內(nèi)穩(wěn)定。 3.先用蒸餾水+工作液的空白管調(diào)零，然后測(cè)定各管 OD 值。

4.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算甘油濃度。

附 Excel 作圖步驟：各標(biāo)準(zhǔn)管 OD 值為 y 軸，標(biāo)準(zhǔn)品濃度為 x 軸。(1)鼠標(biāo)左鍵圈住數(shù)據(jù)，點(diǎn)擊

做圖向?qū)?，選擇-散點(diǎn)圖-，點(diǎn)擊-完成-。(2)鼠標(biāo)右鍵點(diǎn)圖上的某一點(diǎn)，點(diǎn)擊-添加趨勢(shì)線-，點(diǎn)擊

-選項(xiàng)-，點(diǎn)擊-顯示公式-和-R2    值

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