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改良苯酚品紅染色實(shí)驗(yàn)操作步驟!

更新時(shí)間:2022-01-07      瀏覽次數(shù):4288

改良苯酚品紅染色實(shí)驗(yàn)操作步驟!

實(shí)驗(yàn)步驟:

1、取材:查閱相關(guān)植物對(duì)應(yīng)的根尖分裂旺盛期,在此期間剪取新生根尖約2-3cm,純水稍洗凈。

2、預(yù)處理:用秋水仙素或者8-羥基喹啉預(yù)處理或者置于純水中4℃處理約24h(選做)。

3、固定:取出根尖置于卡諾氏固定液(無(wú)水乙醇:冰醋酸=3:1混勻)中4℃固定約1-4h,轉(zhuǎn)移根尖至75%的乙醇中保存;

4、低滲:取出根尖純水稍洗2遍,置于純水中浸泡約30min;

5、解離:取出根尖置于1M HCL溶液中60℃處理10-30min,純水洗2遍,置于純水中浸泡約30min;

6、取材染色:將根尖用純水清洗2遍后置于載玻片上,切取根尖分生區(qū)并撥散,組畫(huà)筆畫(huà)圈,晾干或者稍烤干分生區(qū)組織細(xì)胞,滴加改良苯酚品紅染液染色15-35min;

7、壓片:直接用染色液封片,稍吸除多余的染色液,蓋玻片上覆蓋濾紙,用橡皮擦或者手指平整地按壓玻片進(jìn)行壓片,分散染色體;

8、封片:將制好的玻片放置-20℃下冰凍約10min,取出后用刀片從蓋玻片一角迅速撬開(kāi),晾干或烤干載玻片和蓋玻片,甘油明膠或中性樹(shù)膠封片。

9、顯微鏡鏡檢,圖像采集分析。

染色結(jié)果:

染色體呈深的紫紅色,背景淺的紫紅色或者無(wú)色。

注意事項(xiàng):

1、若固定后的根尖暫時(shí)不使用,保存在75%的乙醇中,下次使用前需要再次固定,4℃條件下約4h。

2、壓片過(guò)程中,防止蓋玻片移動(dòng)或者破裂,得到數(shù)量清晰的染色體,此步驟操作較難成功。

3、陰涼通風(fēng)處可保存1年不變質(zhì)。


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