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液體樣本甘油含量酶法測定試劑盒如何正確使用!

更新時間:2021-12-17      瀏覽次數:861

液體樣本甘油含量酶法測定試劑盒如何正確使用!

描述:甘油是甘油三酯的水解產物。脂蛋白酯酶能水解血液中的甘油三酯;胰脂酶可以水解食物中的甘油三酯;激素敏感脂肪分解酶能水解脂肪細胞中的甘油三酯。與游離脂肪酸一樣,甘油含量是甘油三酯水解反應的可靠檢測指標,但檢測更方便。本試劑盒采用甘油磷酸氧化酶法和經典GPO-Trinder酶學反應相結合的方法,通過比色法測定液體樣本中的甘油含量。經過優(yōu)化后,操作步驟更加簡單,檢測線性范圍在10-1200µmol/L,可靠性和重復性俱佳,適合生物醫(yī)學、食品實驗室檢測。

原理:ATP存在下甘油被甘油激酶磷酸化為3-磷酸甘油,再被甘油磷酸氧化酶氧化產生過氧化氫;在過氧化物酶作用下生色底物轉化為苯醌亞胺,其光密度值與甘油濃度成正比。

適用范圍:測定血液、細胞培養(yǎng)基、體液、酒類飲料中的甘油濃度。

組成   

R1試劑 40 ml

R2試劑 10 ml     

4 mmol/L甘油標準品1 ml

4 oC,儲存3個月。

所需設備:酶標儀、生化分析儀或721、722型可見光分光光度計。最佳工作波長550nm,如無此波長建議優(yōu)先選用570nm、次選530、490nm。

 操作步驟

 樣本處理:

酒類、飲品、清澈液體樣本:可直接進行測定,如超過線性范圍可用蒸餾水或生理鹽水稀釋后再測定。

培養(yǎng)液:取不含酚紅、無顏色、無血清的細胞培養(yǎng)基,如有細胞碎片應4oC,12,000g離心5min,取上清進行測定。

血液:新鮮抗凝血,4oC,2,000g離心5min得到血漿;非抗凝血,先4oC靜置2h得到血清后,2000g離心10min,除去血細胞。將得到的血漿/血清70oC 加熱10分鐘滅活內源脂肪酶,12,000g離心10min ,取上清測定或-20oC保存。

 工作溶液配制:4:1比例,取4 ml試劑R11 ml試劑R2混合,立即使用或4oC保存<1天,變色棄去。

 標準品稀釋:用蒸餾水、生理鹽水或與樣品緩沖液一致的液體,將4 mM甘油標準品倍比稀釋為1000、500、250、125、62.531.25、15.6257.8125 µmol/L,通常取其中4~6管即可,注意設置0濃度對照反應管

 甘油濃度測定:

參見下表進行加樣。為使反應時間盡量一致,減小實驗誤差,可先加入標準品、待測樣品,然后再加入工作溶液。(注意:當甘油濃度較低時,可將待測樣品與工作溶液按照100µl:100µl體積混合,然后再進行測定,但是如果樣品體積超過100µl時將會稀釋工作液中酶的濃度,使反應靈敏度下降。如果待測樣品濃度超過線性范圍,可進行適當稀釋,然后根據稀釋倍數來計算樣品中甘油濃度。)

37oC25oC反應 10分鐘。反應平衡后顏色在60分鐘內穩(wěn)定。

先用蒸餾水+工作液的空白管調零,然后測定各管OD值。

繪制標準曲線并計算甘油濃度。

表一:

  酶標微板測定的加樣比例(檢測范圍10-1200µmol/L

      (可對樣品和工作液比例進行微量調整)


低濃度甘油樣品測定

高濃度甘油樣品測定


空白管

標準品

樣本管

空白管

標準品

樣本管

蒸餾水µl

50



5



標準品µl


50



5


樣品µl



50



5

工作液µl

150

150

150

195

195

195

 表二:

1 ml比色杯測定的加樣比例(檢測范圍10-1200µmol/L


低濃度甘油樣品測定

高濃度甘油樣品測定


空白管

標準品

樣本管

空白管

標準品

樣本管

蒸餾水µl

200



50



標準品µl


200



50


樣品µl



200



50

工作液µl

600

600

600

750

750

750

 本產品僅供科研實驗用,不做其它用途!

 


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