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紅細(xì)胞裂解液(RBC Lysis Buffer,10×) 操作步驟

更新時(shí)間:2019-04-29      瀏覽次數(shù):5628

紅細(xì)胞裂解液(RBC Lysis Buffer,10×) 操作步驟:

注意:絕大多數(shù)情況下,應(yīng)使用無菌去離子水稀釋RBC Lysis Buffer(10×)至1×使用,流式細(xì)胞術(shù)除外。

A、組織細(xì)胞樣本的常規(guī)操作

1、制備細(xì)胞懸液: 新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理,通過適當(dāng)方法制備成細(xì)胞懸液,離心棄上清。

2、裂解: 加入1×RBC Lysis Buffer,輕柔吹打混勻,裂解1~2min。 3、離心,棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,可以重復(fù)上述步驟2和步驟3各一次。

5、洗滌:根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,輕柔混勻重懸沉淀。4℃離心,棄上清,該離心步驟亦可在室溫下操作。

B、組織細(xì)胞樣本的快速操作(無需洗滌)

1、制備細(xì)胞懸液:新鮮組織經(jīng)胰蛋白酶或膠原酶等消化處理,制備細(xì)胞懸液,離心棄上清。

2、裂解:加入細(xì)胞5倍細(xì)胞沉淀體積的1×RBC Lysis Buffer,輕柔吹打混勻裂解。

3、加入PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,輕柔混勻。

4、離心5min,棄紅色上清,本離心步驟亦可在室溫下操作。

5、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,可以重復(fù)上述步驟2~4各一次。

6、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

C、血液樣本的常規(guī)操作

1、取新鮮抗凝血,離心,棄上清。

2、 裂解:加入1×RBC Lysis Buffer,輕柔吹打混勻,裂解1~5min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。

3、離心:棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。

5、洗滌: 根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,輕柔混勻重懸沉淀;4℃離心,棄上清,該離心步驟亦可在室溫下操作。

6、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

D、血液樣本的快速操作(無需洗滌)

1、新鮮抗凝血中加入10倍體積的1×RBC Lysis Buffer,輕輕吹打混勻,裂解4~15min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。

2、加入 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,輕柔混勻。

3、離心,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。

5、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

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