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發(fā)福利啦!Western blot實驗中不同樣本的不同處理方法大全

更新時間:2018-11-06      瀏覽次數(shù):1891

發(fā)福利啦!Western blot實驗中不同樣本的不同處理方法大全

上海信帆生物提供Western blot實驗技術服務,詳情可添加我司客服QQ進行咨詢!

 

樣品處理及保存


1、懸浮細胞樣品:把細胞及培養(yǎng)液一起收集到15ml或者50ml離心管中,1500rpm離心3min,棄去上清;加入10ml 冷PBS輕輕吹打,1500rpm,4℃離心3min,棄去上清;反復2次;第二次棄去上清后,用1ml 冷PBS重懸細胞,移入1.5ml微型離心管,2500rpm(500g),4℃離心5分鐘,盡量去除所有殘留上清,于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況下,一般保存1年,建議盡快檢測。


2、貼壁細胞樣品
2.1 胰酶消化:用胰酶將細胞消化后,含血清的培養(yǎng)基中和胰酶,吹打,收集到15ml或者50ml離心管中,1500rpm離心3min,棄去上清;加入10ml 冷PBS輕輕吹打,1500rpm,4℃離心3min,棄去上清;反復2次;第二次棄去上清后,用1ml 冷PBS重懸細胞,移入1.5ml微型離心管,2500rpm(500g),4℃離心5分鐘,盡量去除所有殘留上清,于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況下,一般保存1年,建議盡快檢測。
2.2 細胞刮子收集細胞:對于某些蛋白(即對胰酶比較敏感或者實驗特殊要求,如E-Cadherin不易用胰酶消化后進行WB檢測),直接用細胞刮子刮下細胞,連同培養(yǎng)基收集到15ml或者50ml離心管中,1500rpm離心3min,棄去上清;加入10ml 冷PBS輕輕吹打,1500rpm,4℃離心3min,棄去上清;反復2次;第二次棄去上清后,用1ml 冷PBS重懸細胞,移入1.5ml微型離心管,2500rpm(500g),4℃離心5分鐘,盡量去除所有殘留上清,于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況下,一般保存1年,建議盡快檢測。


3、動物組織樣品:取下合適的動物或者人的組織樣品后用預冷的PBS或者生理鹽水漂洗,盡量除盡殘留血液,用濾紙把多余PBS吸取干凈。把組織分成約50mg大?。ㄒ罁?jù)實驗目的需要進行調整),用錫紙分別包裝好或者用凍存管裝好,于-80度或者液氮中保存。在避免凍融的情況一般保存1年,建議盡快檢測。


4、植物樣品:取得待測植物樣品后,用蒸餾水把泥土漂洗干凈,用濾紙把多余水分吸取干凈,分裝成合適大小于-80度或者液氮中保存。在避免凍融的情況一般保存1年,建議盡快檢測。


5、細菌樣品:細菌培養(yǎng)完成后,10000rpm離心5min收集細菌,加入PBS吹打,10000rpm離心5min,棄去上清;反復3次,棄去上清后于-80度或者液氮凍存待用。


6、若要檢測磷酸化蛋白,請在3個月內進行。長時間保存樣品容易使磷酸化蛋白去磷酸化而檢測不到磷酸化條帶。


7、提取胞漿、胞核蛋白的樣品應盡量采用新鮮樣品,因為凍存會使細胞漿、細胞核破裂。
8、血液樣品(血漿中蛋白):3000rpm離心20min后收集上清,分裝后于-80度或者液氮凍存待用。3個月以內檢測。


9、運輸時間較長或長距離運送樣品時采用干冰或者液氮。

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