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深入蛋白純化實驗

更新時間:2017-01-17      瀏覽次數(shù):2196

   固定化金屬親和層析(IMAC)是蛋白純化的常用方法,特別適用于純化多組氨酸(His)標簽融合蛋白。金屬離子通過螯合劑(配體)固定到基質(zhì)上,與多組氨酸標簽相互作用,有效的螯合樣品中的融合蛋白。氮川三乙酸(NTA)和亞氨基二乙酸(IDA)是商業(yè)化樹脂中經(jīng)常使用的螯合配基。怎樣選擇合適的配基和金屬離子,應(yīng)用于蛋白純化實驗?zāi)兀?/span>

首先,我們比較一下NTA和IDA。NTA是4價結(jié)構(gòu),IDA是3價結(jié)構(gòu),NTA比IDA多一個羧甲基。結(jié)構(gòu)上的不同,使得NTA比IDA更穩(wěn)定,能得到更高純度的目標蛋白。IDA更小,使得它與基質(zhì)更緊密的結(jié)合,提高了載量,但同時也導(dǎo)致了更多的非目標蛋白的結(jié)合,但IDA相對便宜。

  一些還原劑會影響IDA、NTA的性能。比如DTT會使金屬離子從IMAC 樹脂上剝落,常常會使樹脂的顏色變?yōu)樽厣?;EDTA對配基的影響更大。但實驗顯示,NTA耐受各類化學(xué)試劑的能力明顯優(yōu)于IDA。

總結(jié)起來,選用IMAC純化蛋白前,得先問這幾個問題:

1.蛋白純度、蛋白載量,哪個是你的目標?

2.你的樣本中是否包含一些還原試劑如DTT或EDTA?

3.你的預(yù)算是?

   如果你只是想得到高的蛋白產(chǎn)量,對純度的要求稍微低點,IDA結(jié)合的樹脂可能是你正確的選擇。如果想限度的減少非特異性結(jié)合,可以使用Zn2+ 或Co2+結(jié)合樹脂。從各類數(shù)據(jù)來看,NTA結(jié)合樹脂都表現(xiàn)出極大的*性。而Ni-NTA樹脂則相當于His標簽蛋白純化的行業(yè)標準!

  不同的樣本或許純化的條件不盡相同,但以上zui基本的原則不同樣本都是適用的。

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