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本文討論的范圍包括RNA酶保護(hù)分析，northernblot，原位雜交，半定量RT-PCR和定量RT-PCR。本文不談具體protocol，是因?yàn)楦鞣N書籍和kit說明書上都有，主要說一些原則，而且大部分是失敗和成功的經(jīng)驗(yàn)，還有小組討論結(jié)果以及各種書里七零八落看的內(nèi)容，希望對(duì)大家有用?；虮磉_(dá)的定義：說到基因表達(dá)，是指RNA，還是蛋白？是指mRNA還是包括風(fēng)頭正旺的非編碼RNA？mRNA還有不翻譯的RNA呢。應(yīng)該說轉(zhuǎn)錄水平指的是RNA水平，而蛋白應(yīng)該叫翻譯水平？我們這里就特指編...

中文名：異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)英文名稱：Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside用途：異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一種作用*的誘導(dǎo)劑,不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定,因此被實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用。IPTG常用于需要誘導(dǎo)β-半乳糖苷酶活性的克隆實(shí)驗(yàn)。它常與X-Gal或Bluo-Gal結(jié)合使用，用于重組細(xì)菌菌落的藍(lán)白篩選，這些菌落可以誘導(dǎo)lac操縱子在大腸桿菌中的表達(dá)。IPTG與lacI阻遏蛋白結(jié)合并改變其構(gòu)象而發(fā)揮作用，防止β-半乳糖苷...

一、原理植物激素（planthormone）免疫定量主要有放射免疫分析（RIA）和酶聯(lián)吸附免疫分析（ELISA），由于前者操作上欠安全等原因，目前常采用后一種類型。在ELISA中，抗原抗體反應(yīng)的檢測(cè)依靠酶標(biāo)記物來實(shí)現(xiàn)，常用的酶有辣根過氧化物酶和堿性磷酸酯酶。酶可直接標(biāo)記激素分子，稱為酶標(biāo)植物激素，也可標(biāo)記于第二抗體（識(shí)別抗激素抗體Fc片段的抗體或金黃色葡萄球菌A蛋白），稱為酶標(biāo)二抗。這兩類標(biāo)記物分別用于固相抗體型和固相抗原型ELISA。A.固相抗體型ELISA：將抗激素的單克...

在細(xì)胞中，蛋白質(zhì)并不是孤單的個(gè)體。大多數(shù)蛋白通過與分子伴侶或其他蛋白形成復(fù)合物而發(fā)揮其功能。因此，在了解細(xì)胞的生物學(xué)特性時(shí)，蛋白質(zhì)相互作用（PPI）研究就成了重要一環(huán)。在藥物開發(fā)的過程中，這一信息也至關(guān)重要，有助于確認(rèn)藥物靶點(diǎn)。一提起蛋白質(zhì)相互作用研究，你的腦海中可能馬上浮現(xiàn)出：酵母雙雜交、免疫共沉淀等技術(shù)。的確，這些都是經(jīng)典方法，可有效檢測(cè)體內(nèi)體外蛋白質(zhì)相互作用。然而，它們不能提供動(dòng)態(tài)的蛋白相互作用信息，似乎還缺乏一些說服力?；诖?，共振能量轉(zhuǎn)移這種方法受到人們的青睞。這種...

痛風(fēng)發(fā)作會(huì)在人體關(guān)節(jié)部位引發(fā)炎癥和劇烈疼痛，但過了一段時(shí)間后，炎癥通常會(huì)自動(dòng)減弱，疼痛感也逐漸消失。這為何會(huì)發(fā)生?德國(guó)研究人員發(fā)現(xiàn)，原因在于一種人體免疫細(xì)胞的“自殺式攻擊”。痛風(fēng)的病因是體內(nèi)嘌呤物質(zhì)新陳代謝紊亂，導(dǎo)致尿酸合成增加、排出減少，造成高尿酸血癥。血液中尿酸濃度過高時(shí)，尿酸會(huì)以微小的鈉鹽結(jié)晶(俗稱痛風(fēng)石)形式析出，積累在關(guān)節(jié)、軟骨和腎臟中，引發(fā)炎癥。德國(guó)埃爾朗根大學(xué)近日發(fā)表研究公報(bào)稱，其研究人員發(fā)現(xiàn)，人體免疫系統(tǒng)的嗜中性粒細(xì)胞在抗擊痛風(fēng)引發(fā)的炎癥中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。實(shí)驗(yàn)...

Dmem(A)細(xì)胞培養(yǎng)基（粉末型）成分序號(hào)化合物名稱含量(mg/L)序號(hào)化合物名稱含量(mg/L)1無水氯化鈣.2H2O265.0018L-絲氨酸42.002硝酸鐵.9H2O0.1019L-蘇氨酸95.003氯化鉀400.0020L-色氨酸16.004無水硫酸鎂97.6721L-酪氨酸72.005氯化鈉6400.0022L-纈氨酸94.006無水磷酸二氫鈉109.0023D-泛酸鈣4.007丁二酸75.0024酒石酸膽堿7.208丁二酸鈉100.0025葉酸4.009L-鹽酸...

Q：westernblot中脫脂奶粉封閉的是哪些蛋白?原理是什么?A：脫脂奶粉中主要是乳清蛋白和酪蛋白。原理就是用非抗原的蛋白去封閉膜，避免標(biāo)記抗體固定在膜上引起背景增高。Q：請(qǐng)問封閉液和抗體稀釋液用BSA和脫脂奶粉有什么區(qū)別呢?有人跟我說奶粉的封閉效果更好些，但是通常只能用于WesterBlot，如果要做elisa或者phagedisplay時(shí)候，蛋白鋪板的話，不能使用脫脂奶粉?？墒且灿腥苏f可以，請(qǐng)問是否有這個(gè)說法呢?A：所謂封閉是用以減少或消除載體上的非特異性結(jié)合蛋白的分...

考馬斯亮蘭G250與蛋白質(zhì)結(jié)合，在0－1000ug/ml范圍內(nèi)，于波長(zhǎng)595nm處的吸光度與蛋白質(zhì)含量成正比，可用于蛋白質(zhì)含量的測(cè)定?？捡R斯亮蘭G250與蛋白質(zhì)結(jié)合迅速，結(jié)合產(chǎn)物在室溫下10分鐘內(nèi)較為穩(wěn)定，是一種較好的蛋白質(zhì)定量測(cè)定方法。1.實(shí)驗(yàn)部分1.1儀器與試劑：LabtechUVPOWER紫外分光光度計(jì)；玻璃比色皿一套；考馬斯亮藍(lán)G250；牛血清蛋白；超純水。1.2試液的制備：牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000ug/ml）的制備稱取100mg牛血清蛋白置100ml容量瓶中，加...

（一）、儀器設(shè)備1）18cm不銹鋼高壓鍋或電爐或醫(yī)用微波爐；2）水浴鍋（二）、試劑1）pbs緩沖液（pH7.2～7.4）：NaCl137mmol/L，KCl2.7mmol/L，Na2HPO44.3mmol/L，KH2PO41.4mmol/L。2）0.01mol/L檸檬酸鹽緩沖液（CB，pH6.0，1000ml）：檸檬酸三鈉3g，檸檬酸0.4g。3）0.5mol/LEDTA緩沖液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O，用10mmol/LNaOH調(diào)至pH...

三月二十日，來自中科院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院、武漢菲沙基因信息有限公司(Frasergen)和加拿大西蒙佛雷澤大學(xué)的研究人員，在學(xué)術(shù)期刊《JournalofBioLogicalChemistry》發(fā)表學(xué)術(shù)論文，該研究檢測(cè)了iPSC生成及隨后基因校正過程中的基因組不穩(wěn)定性，指出重編程和基因打靶可能會(huì)產(chǎn)生大量但卻不同的基因組變化，因此，在iPSC誘導(dǎo)時(shí)及基因打靶之后，必須進(jìn)行嚴(yán)格的基因組監(jiān)控和選擇。本文通訊作者是中科院生物醫(yī)藥與健康研究院研究員潘光錦博士，其2002年碩士畢業(yè)于...